1. Введення
4-метоксисаліцилат калію (4MSK) зі структурою, подібною до саліцилової кислоти, є новим медичним відбілюючим інгредієнтом, який використовується в косметиці за відбілюючу дію та є ефективним інгредієнтом у косметиці. Володіє здатністю покращувати баланс тонусу шкіри, знімати надмірну пігментацію, коригувати нетипову проліферацію епідермісу, сприяти виведенню меланіну та запобігати появі веснянок і плям.

2. Основні функції
Пігментація, веснянки та відсутність чіткості є проблемою для багатьох азіатських жінок, тому засоби для освітлення шкіри викликають великий інтерес у азіатських жінок. Ефективність 4-метоксисаліцилату калію вивчали провідні косметичні компанії, результати наведено нижче.
2.1. Пригнічення меланогенезу
Клітини меланоми миші (B16) культивували протягом трьох днів у присутності та відсутності 4MSK, і вимірювали кількість клітин і кількість меланіну, виробленого при заданій кількості клітин. Було отримано співвідношення кількості клітин і кількості меланіну в присутності 4MSK до кількості меланіну в відсутність 4MSK і таким чином проаналізовано вплив 4MSK на меланогенез.
Результати показують, що кількість клітин і кількість меланіну після 3 днів додавання 4MSK показано на малюнку 2. Було підтверджено, що 4MSK має залежну від концентрації інгібуючу дію на меланогенез, а результати тесту Вільямса показали, що бути статистично значущим для кластерів додавання 3 x 10-4 і 10-3 моль/л у порівнянні з відсутністю додавання 4MSK. Однак не було виявлено впливу на проліферацію клітин для жодної з перевірених концентрацій 4MSK.

2.2. Імпеданс активності курамінідази
Для оцінки активності тирозинази в неклітинних системах субстратом був L-ДОФА, а кількість продукції допахрому в результаті його метаболізму аналізували за допомогою тесту на поглинання 475 нм.
Швидкість імпедансу активності тирозинази за допомогою 4MSK визначали шляхом додавання розчину 4MSK і лізату до вищевказаної реакційної системи та залишаючи цю суміш реагувати протягом 90 секунд при кімнатній температурі, одержуючи співвідношення значень, перевірених при додаванні розчину 4MSK, порівняно з група лізату.

2.3. Пригнічення УФ-індукованого впливу на диференціювання кератиноцитів
Відразу після опромінення 3D-моделі шкіри УФ-світлом до поверхні моделі шкіри додавали розчин 4MSK, інкубували протягом 30 хвилин, а потім видаляли 4MSK та інкубували протягом 1 дня. Розчин 4MSK був замінений середовищем для лізису з метою контролю. Моделі шкіри, відібрані після інкубації, пофарбували антитілами проти тропіну для імуногістохімічних досліджень і миттєвої RT-PCR (полімеразна ланцюгова реакція зворотної транскрипції) для кількісного визначення експресії мРНК тропіну.
В результаті імуногістохімічних досліджень з антитілами проти трофобласта тривимірна модель шкіри була схожа на тест in vivo з присутністю білка трофобласта, маркера диференціювання, поблизу зернистого шару. Після одного дня інкубації цієї моделі шкіри в УФ-лунках експресія тропоніну знизилася. Додавання 4MSK до моделі шкіри відразу після УФ-опромінення значно пригнічувало УФ-індуковане зниження експресії тропоніну.
Крім того, кількісний ПЛР-аналіз РНК, виділеної з тієї самої моделі шкіри, показав, що зниження експресії мРНК тауролітіонеїну в групі, опроміненій УФ, було пригнічене в групі з додаванням 4MSK. Результати, підтверджені імуногістохімічними дослідженнями, тобто зниження експресії тропоніну на рівні білка та пригнічення зниження експресії 4MSK, були підтверджені також на рівні мРНК.

2.4 Ефект захисту пігментації людини
Дванадцять здорових дорослих чоловіків-добровольців опромінювали UVA та UVB випромінюванням у 4 місцях на животі протягом 3 днів за допомогою джерела штучного ультрафіолетового випромінювання в еквіваленті 1MED (мінімальна еритемна доза) один раз на день для кожного випробуваного. Чотири креми: 1%, 3%, 5% 4MSK і базовий крем використовувалися як тестові зразки і наносилися 3 рази на день протягом 7 днів від початку ультрафіолетового опромінення. Щоб оцінити ступінь гіперпігментації, відтінок шкіри до і після нанесення двічі вимірювали кольоровим тестером і усереднювали, щоб отримати кількість змін до і після впливу, порівнюючи ділянки, на які наносилися різні концентрації кремів 4MSK, із ділянками, на яких наносили базові креми.
Всі 12 чоловіків використовувалися як суб'єкти. Середній вік досліджуваних становив 38,4 року. Значення L* для кожного місця нанесення перед нанесенням досліджуваного продукту наведено в таблиці 1a. Значення L* були проаналізовані на кожній тестовій ділянці перед нанесенням досліджуваної продукції та підтверджено відсутність різниці в тонах шкіри між ділянками перед початком тесту.
Значення ΔL для кожного тестового місця до нанесення досліджуваного виробу та через 7 днів після нанесення показано на малюнку нижче. ΔL місця нанесення з 1-відсотковим кремом 4MSK був статистично значно меншим, ніж ΔL місця нанесення з базовим кремом. Крім того, ΔL прогресивно зменшувався зі збільшенням вмісту 4MSK, таким чином зроблено висновок, що 4MSK має дозозалежний ефект проти пігментації. Крім того, протягом періоду тестування не спостерігалося жодних аномалій шкіри, таких як набряк, почервоніння або свербіж.

2.5. Покращення дисбалансу проліферації та диференціації кератиноцитів і сприяння плавному вивільненню меланіну
Дослідження на меланоцитах показали значне пригнічення меланогенезу при концентрації 3 x 10-4 моль/л з повним потенціалом порівняно з існуючими відбілюючими активними інгредієнтами. Дослідження механізму дії пригнічення вироблення меланіну та того, чи перешкоджає активності ферменту курамінідази, який необхідний для вироблення меланіну, показали, що 4MSK не тільки пригнічує вироблення меланіну, але також впливає на перешкоджання активності курамінідази.
Відомо, що основною причиною пігментації є ультрафіолетове світло, яке спричиняє тимчасову аномалію експресії маркерів диференціації в клітинах, що утворюють кератин. Базуючись на наших висновках про те, що дисбаланс диференціаційного маркера є хронічним навіть без УФ-опромінення в місці пігментації, ми провели дослідження щодо нормалізації диференціаційного маркера за допомогою 4MSK. Використовуючи тривимірну модель шкіри, ми продемонстрували, що 4MSK має захисну дію проти незбалансованої експресії тропоміозину, маркера диференціювання кератиноцитів, як на рівні мРНК, так і на рівні білка.

По-друге, випробування in vivo підтвердили, що досліджуваний продукт, що містить 15 відсотків 4MSK, має залежний від концентрації захисний ефект проти УФ-пігментації. Протягом усього періоду випробування не спостерігалося жодних аномалій шкіри через використання тестового продукту, що містить 4MSK, що робить 4MSK безпечним та ефективним косметичним інгредієнтом.
Дослідження in vitro підтвердили прямий інгібуючий ефект 4MSK на меланогенез і його вплив на проліферацію та диференціювання кератин-утворюючих клітин. Обидві ці дії мають захисну дію на виробництво та вивільнення меланіну, що викликає надлишок меланіну в шкірі. Тести in vivo показали, що 4MSK є чудовим захистом від УФ-пігментації, і тому вважається, що 4MSK також ефективний проти пігментації, веснянок і тьмяності у вигляді надлишку меланіну шкіри.

3. Додатки

4-метоксисаліцилат калію в основному використовується в косметичних продуктах.

4. Блок-схема

2,4-Дигідроксибензойна кислота → додати лужний водний розчин гідроксиду натрію → розчинити → охолодити → → відрегулювати PH → осад → центрифугувати → промити → висушити → неочищена 4-метоксисаліцилова кислота → нагріти → перемішати → екстрактити фільтр → сухий → чистий 4-метоксисаліцилова кислота → відрегулюйте PH → перемішайте 3 → відновіть розчинник → охолодіть кристалізацію → витягніть фільтр → сирий 4-калій метоксисаліцилової кислоти → розчиніть сирий → знебарвте → витягніть фільтр → охолодіть кристалізацію → вакуум сухий → чистий 4-метоксисаліциловий калій

5. Стандарт якості

Відповідно до Enterprise Standard

Предмети	Технічні характеристики	Результати
Зовнішній вигляд	Білий або майже білий порошок	Білий порошок
Ідентифікація	ВЕРХ, ЯМР, РХ-МС	Відповідає стандарту
Важкі метали	Менше або дорівнює 20 ppm	<20ppm
як	Менше або дорівнює 2 ppm	<2ppm
Втрати при висиханні	Менше або дорівнює 0,5 відсотків	0.29 відсотків
Поодинока домішка	Менше або дорівнює 1.0 відсотку	Відповідає
Аналіз (ВЕРХ)	Більше або дорівнює 98.0 відсотків	98,56 відсотка